Sravnitelʹnai︠a︡︠ t︡sitogenetika i kariosistematika mlekopitai︠u︡shchikh / V.N. Orlov, N. Sh. Bulatova.
- Orlov, V. N. (Viktor Nikolaevich)
- Date:
- 1983
Licence: Attribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
Credit: Sravnitelʹnai︠a︡︠ t︡sitogenetika i kariosistematika mlekopitai︠u︡shchikh / V.N. Orlov, N. Sh. Bulatova. Source: Wellcome Collection.
26/420 page 22
![Вся процедура кариологического исследования может быть сведена к трем основным этапам: 1) приготовление хромосомных препаратов; 2) различные способы их окраски и 3) анализ. 1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ХЮМОСОМНЫХ ПРЕПАРАТОВ Свежие ткани животных, обладающие высокой митотической актив¬ ностью (костный мозг, селезенка, семенники, яичники, эмбриональные ткани и др.). можно непосредственно использовать для получения пре¬ паратов хромосом без предварительного более или менее продолжитель¬ ного культивирования в питательных средах. В тех случаях, когда при¬ ходится определять кариотип у млекопитающего крупных размеров, пользуются, как правило, иными методами получения хромосомных пре¬ паратов. Для этих целей у животного берут кровь для постановки куль¬ туры лейкоцитов, пунктат костного мозга или кусочек кожи и хромосом¬ ные препараты готовят из культуры клеток. Различия между прямым и культуральным методами касаются лишь первого этапа работы, а имен¬ но способа получения материала, из которого будут приготовлены пре¬ параты хромосом. Начиная с момента получения суспензии клеток в ги¬ потоническом растворе непосредственное приготовление хромосомных препаратов остается в сущности неизменным. В настоящее время цитогенетики используют различные модифика¬ ции одного основного метода, разработанного во второй половине 50-х годов и произведшего в свое время подлинную революцию в кариоло- гических исследованиях позвоночных. Метод высушенных препаратов Со времени описания этого метода [Hsu, 1952; Ford, Hamerton, 1956; Rothfels, Siminovitch, 1958] было предложено очень много его модифи¬ каций, и сейчас почти каждый исследователь, длительно работавший с хромосомами, пользуется собственной вариацией этого метода. Ниже приводится методика, принятая в нашей лаборатории. Оборудование, реактивы: шприц с иглами, ножницы, центрифуга, про¬ бирки центрифужные, пастеровские пипетки со шлангом или грушей, стекла предметные, коробки для препаратов, спиртовка, термометр или термостат, холодильник; колхицин 0,04%-ный, раствор цитрата натрия 0,9—1%-ный и/или раствор KCl 0,075 M, метиловый спирт, ледяная ук¬ сусная кислота. Зверька колхицинируют за 1—1,5 ч до забоя, делая инъекцию кол¬ хицина внутрибрюшинно из расчета 1 мл на 100 г массы животного. Кол¬ хицин и его аналог колцемид блокир)аот образование веретена деления клетки на стадии метафазы. Поэтому в митотически активных тканях накапливаются клетки, остановившиеся в своем делении на стадии ме¬ тафазы. Кроветворные органы — костный мозг и селезенка — наиболее предпочтительны для получения хромосомных препаратов. От очень мел¬ ких зверьков целесообразно брать и то и другое, что позволяет получить больше препаратов. От более крупных, размером с мьппь и более, обыч¬ но достаточно костного мозга из обеих или даже одной бедренной кости. 22](https://iiif.wellcomecollection.org/image/b18034020_0027.JP2/full/800%2C/0/default.jpg)
