Sravnitelʹnai︠a︡︠ t︡sitogenetika i kariosistematika mlekopitai︠u︡shchikh / V.N. Orlov, N. Sh. Bulatova.
- Orlov, V. N. (Viktor Nikolaevich)
- Date:
- 1983
Licence: Attribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
Credit: Sravnitelʹnai︠a︡︠ t︡sitogenetika i kariosistematika mlekopitai︠u︡shchikh / V.N. Orlov, N. Sh. Bulatova. Source: Wellcome Collection.
28/420 page 24
![Стимулирование миготических делений in vivo У старых или долго живущих в неволе животных митотическая ак¬ тивность в тканях обычно понижена, и число метафаз на хромосомных препаратах в таких случаях невелико. Поэтому для стимуляции мито- тической активности у взрослых животных предлагается за 12 ч до взя¬ тия материала провести кровопускание из хвостовой вены [Дыбан, Ба¬ ранов, 1978]. В последнее время получил распространение метод стиму¬ лирования митозов в костном мозге с помощью дрожжей [Lee, Elder, 1980]. Животным заблаговременно вводят подкожно раствор пекарс¬ ких дрожжей с глюкозой (2—3 г сухих дрожжей и 5—6 г глюкозы на 25 мл теплой воды, инкубируются 20-40 мин при 40°) из расчета 0,5 мл смеси на 25 г массы. Через сутки или двое животное забивают и готовят хромо¬ сомные препараты описанным выше методом. Хромосомные препараты из кратковременной культуры клеток Кратковременная культура клеток и колхивд1нирование in vitro дают возможность приготовить хромосомные препараты в таких случаях, когда описанная выше методика неприменима. Таким образом удается получить хорошие хромосомные препараты из пунктата костного мозга, взятого прижизненно, при отстрелах животных, а также вообще из любых забитых животных, после смерти которых прошло от одного часа до десятков часов (в зависимости от температуры, при которой хранился труп). Ма¬ лая трудоемкость и быстрота приготовления препаратов, а также ненуж¬ ность соблюдения стерильности позволяют применять эту методику в полевых условиях. Лучшие результаты дает использование костного мозга, извлеченного из грудины при помощи костно-мозговой иглы. Получению хромосомных препаратов из костного мозга бедренных костей у крупных животных часто мешает наличие жира. Оборудование: то же, плюс культуральные среды и сыворотка крзшно- го рогатого скота. Колхищш 0,0049?^ный. Извлеченные из грудины клетки мозга помещают в раствор, состоящий на 85% из среды 199 и на 15% из инактивированной телячьей сыворотки. Применяются и иные соотношения компонентов, и часто вместо среды 199 используют раствор Хэнкса. В среду вводят колхищ1н из расчета 1 гам¬ ма (10~^ г) на 1 мл взвеси. Суспензию выдерживают от 40 мин до 1,5 или более часов при 37° в термостате, после чего центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. В дальнейшем работают по стандартной методике. Хромосомные препараты из эмбрионального материала, как правило, получают при введении его в культуру. Но если нет условий для культуры тканей, то можно получить хромосомные препараты непосредственно из эмбриональной ткани. Для этого активно делящихся ткани эмбрионов (печень, селезенка и пр.) или целый эмбрион на ранних стадиях разви¬ тия помещают в центрифужную пробирку, содержащую питательную сре¬ ду Игла с глутамином (или среду 199), и ресуспензируют медицинским шприцем с толстой иглой. Клетки остаются в суспензии при температу¬ ре 37° в течение 1—1,5 ч. За 40 мин до конца инкубирования вводят 0,2 мл 0,004%-ного раствора колхицина. Затем клетки осаждают центрифугиро¬ ванием и всю дальнейшую обработку проводят как описано выше. 24](https://iiif.wellcomecollection.org/image/b18034020_0029.JP2/full/800%2C/0/default.jpg)
