Sravnitelʹnai︠a︡︠ t︡sitogenetika i kariosistematika mlekopitai︠u︡shchikh / V.N. Orlov, N. Sh. Bulatova.
- Orlov, V. N. (Viktor Nikolaevich)
- Date:
- 1983
Licence: Attribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0)
Credit: Sravnitelʹnai︠a︡︠ t︡sitogenetika i kariosistematika mlekopitai︠u︡shchikh / V.N. Orlov, N. Sh. Bulatova. Source: Wellcome Collection.
36/420 page 32
![и Гудпастором [Bloom, Goodpasture, 1976] для хромосом млекопита¬ ющих. Этот метод усовершенствован Лоу с соавторами [Lau et al., 1978], ero мы и приводим. Препараты помещают на 30 мин в боратный буфер (0,1 M Na2S04, 0,005 M Na2B40i, pH 9,0), отмывают в дистиллирован¬ ной воде 2—5 мин, затем окрашивают 50%-ным раствором AgNOa. Для этого каплю раствора помещают на стекло с препаратом, закрывают по¬ кровным стеклом и во влажной камере (чашке Петри с увлажненной фильтровальной бумагой) ставят в термостат при 50° на 12—18 ч. Окра¬ шенные препараты анализируют под иммерсией, фотографируют и в со¬ ответствии с оригинальной методикой окрашивают на Q-полосы акри¬ хин-ипритом или 33258 Hoechst. Таким образом, на одном и том же препарате, на одних и тех же хромосомах получают NOR- и Q-окраску, что позволяет идентифицировать хромосомы, несущие ядрышкообра- зующие районы. Методики последовательной окраски предложены и для сочетания NOR- и Сюкраски как до [Tantravahi et al., 1977], так и после обработ¬ ки серебром [Mandahl, 1979; Nielsen! et al., 1979]. Наилучшие резуль¬ таты дает следующая последовательность обработок [Графодатский, 1981], позволяющая на одном препарате получить NOR-окраску, обык¬ новенную и G-окраску хромосом. Препараты сначала окрашиваются се¬ ребром по Лоу или другим методом, метафазные пластинки с окрашен¬ ными ядрышковыми организаторами фотографируются; затем серебро отмывают в растворе красной кровяной соли, споласкивают в воде, вы¬ сушивают, переокрашивают азур-эозином для получения обыкновенной окраски, снова фотографируют те же метафазы. Краску отмывают в фик¬ саторе метанол—ледяная уксусная кислота (3:1), и препараты переокра¬ шивают по методу Сибрайт, вновь фиксируя отмеченные метафазы на фотопленке. Таким образом удается точно локализовать районы ядрыш- ковых организаторов в хромосомных наборах исследуемых видов и вы¬ явить их соответствие с зонами вторичных перетяжек или иными районами хромосом. 3. АНАЛИЗ ХРОМОСОМНЫХ ПРЕПАРАТОВ Для визуального анализа хромосомных препаратов пригодны световые микроскопы любого типа с иммерсионными объективами х90 или хЮО. Обычно предметное стекло просматривается полностью челноком. По¬ иск метафазных пластинок ведут при малом увеличении микроскопа, порядка 100—120. Такого увеличения вполне достаточно не только для обнаружения метафазной пластинки, но и при некотором навыке иссле¬ дователя для оценки ее качества. Хорошей считается метафазная пла¬ стинка, в которой хромосомы лежат отдельно друг от др5^а, однако если некоторые хромосомы лишь частично накладываются, то такая пластинка может быть использована. Совершенно обязательно, чтобы все хромосомы лежали в одной плоскости. Форма метафазной пластинки должна быть по периферии округлой или овальной, но в последнем случае ее большой диаметр должен составлять не более двух малых. Слишком сильный раз¬ брос хромосом обычно сопровождается утерей некоторых из них, и та¬ кие пластинки для анализа непригодны. Хромосомы не должны быть слишком спирализованы, иначе бывает невозможно правильно опреде- 32](https://iiif.wellcomecollection.org/image/b18034020_0037.JP2/full/800%2C/0/default.jpg)
